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2019-04-10 19:01
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详细说明

Flash氨基柱是以硅胶为载体,键合了丙胺基官能团,这类填料属于极性固定相和弱阴离子交换剂,具有双重作用,特有的保留性能.在它能与有机溶剂体系中,可与带有-OH,-NH,或-SH 官能团的分析物形成氢键.也可在酸性条件下做弱阴离子交换剂用除去样品中的磺酸跟及强阴离子干扰物.
1 氨基柱(-NH2)
氨基柱可以同时用于正相条件和反相条件,但多用于正相色谱条件。使用时需注意,正相反相交替使用时必需用异丙醇过度,保证柱保存溶剂与流动相互溶。
新购氨基柱老化处理及使用基本程序如下:
1)若需要在正相条件下使用:
①用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲洗约50倍柱体积[备注:氨基柱出厂保存溶剂多用正相溶剂,eg.正己烷-乙腈(99:1)]。
②再根据待分析用正相流动相极性选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲洗约10倍柱体积。
③用正相流动相平衡1h以上,确保柱压控制在6000Psi以内,以防止柱头塌陷。待基线平稳后,进样检测。如果要使用的流动相中含有缓冲盐类,在使用流动相平衡之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,冲洗约10倍柱体积,避免缓冲盐在分析柱内析出。
④分析完毕,用异丙醇,以0.5ml/min流速冲洗色谱柱约30倍柱体积→再用甲醇,以1ml/min流速冲洗色谱柱约10倍柱体积→再用异丙醇,以0.5ml/min流速冲洗色谱柱约10倍柱体积。若使用的分析用流动相中含有缓冲盐类,分析完毕需先用不含缓冲盐的同比例流动相冲洗约30倍柱体积,再按上述方法冲洗。
⑤再用色谱柱说明书中规定的正相保存溶剂以1ml/min冲洗约10倍柱体积,保存即可,一般用正己烷-乙腈(99:1)。
⑥重新在正相条件下使用时,重复上述①——⑤过程即可,时间可适当减少一半左右。
2)若需要在反相条件下使用:
①先用正己烷-乙腈(99:1)以0.5ml/min的流速冲洗约30倍柱体积
→再依次以0.5ml/min的流速,用等量的氯仿→异丙醇→甲醇→甲醇-水(50:50)分别冲洗柱子约10倍柱体积→再以0.5ml/min的流速,用pH11.0以下的氢氧化钠溶液冲洗柱子约30倍柱体积(注意:pH值切不可超过11.0)→立即用水以0.5ml/min的流速冲洗柱子约30倍柱体积→最后换成反相流动相平衡1h以上,待基线平稳,进样检测。(备注:若要使用的反相流动相中含有缓冲盐类,在用反相流动相平衡之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,冲洗约10倍柱体积,避免缓冲盐在分析柱内析出。在反相条件下使用时,要特别注意控制pH值范围及流动相中水的比例,pH值越低越易发生键合相水解,流动相中水的比例越高也越易发生键合相水解。最理想的pH范围在pH3.0-7.0,决不允许超过11.0。)
②反相条件下使用完毕,净化处理程序同C18柱,但需注意,冲洗溶剂中有机相不能低于10%;净化完毕,先用甲醇以0.5ml/min的流速冲洗柱子约10倍柱体积→然后用异丙醇以0.5ml/min的流速冲洗柱子约10倍柱体积→最后用色谱柱说明书中规定的正相保存溶剂[一般用正己烷-乙腈(99:1)]以1ml/min冲洗约10倍柱体积→密封,保存即可。
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